Sant'Ana está sentada, em posição frontal, com a cabeça levemente voltada para a esquerda. Nossa Senhora menina está em pé, à esquerda da mãe, de perfil, com a cabeça inclinada para a esquerda e o olhar direcionado para baixo. Ambas seguram livro aberto sobre o colo de Sant'Ana, que envolve a filha com o braço esquerdo. Os panejamentos são movimentados, com destaque para a sua coloração, em que predominam tons de amarelo, marrom, vermelho, verde, azul e branco. A cabeleira de Nossa Senhora é comprida e trabalhada em estrias, com presença de mechas nas laterais. A cadeira, sem espaldar, é recortada na altura do assento e tem pernas ligeiramente diagonalizadas.